2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Yüksək səmərəliliyi və yüksək stres müqaviməti ilə sürətli PCR premiksi.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ, DNT şablonu və primerlər istisna olmaqla, PCR reaksiyasının bütün əsas hissələri olan yeni optimallaşdırılmış və təkmilləşdirilmiş istifadəyə hazır 2 × PCR premiksidir.

Pişik Yox Qablaşdırma Ölçüsü
4993001 1 ml
4993002 5x1ml
4992912 20x5x1 ml
4992913 5 × 1 ml
4992920 20 × 5 × 1 ml
4992921 20 × 5 × 1 ml

Məhsul Detalları

Təcrübə nümunəsi

FAQ

Məhsul Etiketləri

Xüsusiyyətləri

■ Yüksək amplifikasiya səmərəliliyi: Müxtəlif ölçülü (5 kb -dən aşağı) DNT parçaları və mənbələri səmərəli şəkildə gücləndirilə bilər.
■ Yüksək həssaslıq: Genomik şablonlardan ən az 10 pq hədəf fraqmentləri gücləndirilə bilər.
■ Yüksək stresə qarşı müqavimət: Kobud şəkildə çıxarılmış şablon/bakteriya mədəniyyəti kimi yüksək çirkli məzmunlu şablonlar üçün hədəf parçası asanlıqla gücləndirilə bilər. Polimeraza aktivliyi təkrar donma və ərimədən təsirlənməyəcək.
■ Tətbiqlər üçün əlverişlidir: Reaksiya sistemi asanlıqla və tez hazırlandı. Gücləndirilmiş fraqment, TA klonlaması üçün əlverişli olan 3 ′ uclu dA-çıxmasını ehtiva edir.

Spesifikasiya

Növ: Taq DNT polimeraz
Nümunə: Təmizlənmiş/kobud şəkildə çıxarılmış şablon/bakteriya mədəniyyəti
Şablon: > 10 səh
Parça ölçüsü: <5 kb
Tətbiqlər: DNT parçalarının PCR gücləndirilməsi, DNT etiketlənməsi, primer uzadılması, ardıcıllığın təyin edilməsi, geniş miqyaslı gen aşkarlanması, yarı kəmiyyətli PCR təcrübələri, iz DNT-nin aşkarlanması və s.

Bütün məhsullar ODM/OEM üçün fərdiləşdirilə bilər. Ətraflı məlumat üçün,zəhmət olmasa Xüsusi Xidmətə (ODM/OEM) basın


  • Əvvəlki:
  • Sonrakı:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Şəkil 1. Reagentlərin stress müqavimətini aşkar etmək üçün fərqli mənbələrdən olan şablonlar TIANGEN Taq MasterMix II və Təchizatçı TR -dən ümumi Taq Mix tərəfindən gücləndirilmişdir. Nəticələr göstərir ki, TIANGEN məhsulları xam genomik şablonlardan və bakteriya mədəniyyətindən hədəf parçaları gücləndirə bilər və stress müqaviməti Təchizatçı TR -dən daha yaxşıdır. A: TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit tərəfindən çıxarılmış xam genomik şablon. Prp/DN: İnsan qan nümunələrinin xam çıxarılması və aşkarlanması. Pirinç: Düyü nümunələrinin xam çıxarılması və aşkarlanması. B: Koloniya PCR. PCR parçası 700 bp -dir.
    M: TIANGEN Marker III
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Fərqli mənbələrdən və fərqli uzunluqdakı şablonlar üçün yaxşı universallıq
    Şəkil 2. Fərqli mənbələrdən və uzunluqlardan fraqmentlər TIANGEN istifadə edərək gücləndirilmişdir Taq MasterMix II (A) və adi Taq Təchizatçı TK (B), Təchizatçı TR (C), Təchizatçı V (D) və Təchizatçı G (E) qarışığı. Nəticələr göstərir ki, TIANGEN məhsullarının hərtərəfli performansı gücləndirmə qabiliyyəti, spesifikliyi və universallığı baxımından ən yaxşısıdır. M: TIANGEN Marker III1: Soya genomik DNT şablonu (120 bp);

    2-3: Pirinç genomik DNT şablonu (694 bp, 2258 bp);

    4: Pambıq genom DNT şablonu (200 bp);

    5: Escherichia coli genomik DNT şablonu (2298 bp);

    6-7: Siçan genomu DNT şablonu (1 kb, 2 kb);

    8-10: Siçovulların genomik DNT şablonu (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

    11-18: İnsan genomu DNT şablonu (300 bp, 448 bp (GC%: 74.8%), 1100 bp, 750 bp,

    1000 bp, 1090 bp (GC%: 70.4%), 2 kb, 4 kb)

     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Yüksək həssaslıq
    Şəkil 3. Fərqli siçovul və insan DNT fraqmentlərinin konsentrasiyası TIANGEN istifadə edərək gücləndirilmişdir Taq MasterMix II (A), adi Taq Gücləndirmə həssaslığını aşkar etmək üçün müvafiq olaraq Təchizatçı V (B) və Təchizatçı TK (C) qarışığı. Nəticələr göstərir ki, TIANGEN məhsulu genom şablonundan hədəf parçanı 0,01 ng qədər gücləndirə bilər və həssaslığı Təchizatçı V və TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate giriş 1-8 məhsullarından daha yaxşıdır. : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng.
    S: Gücləndirici bantlar yoxdur

    A-1 Şablon

    ■ Şablonda protein çirkləri və ya Taq inhibitorları və s. Var - DNT şablonunu təmizləyin, protein çirklərini çıxarın və ya təmizləyici dəstlərlə şablon DNT çıxarın.

    ■ Şablonun denaturasiyası tamamlanmadı ——Denaturasiya temperaturunu uyğun şəkildə artırın və denaturasiya müddətini uzatın.

    ■ Şablonun deqradasiyası-Şablonu yenidən hazırlayın.

    A-2 astar

    ■ Astarların keyfiyyətsiz olması-Astarı yenidən sintez edin.

    ■ Astar deqradasiyası - Yüksək konsentrasiyalı astarları qorumaq üçün kiçik həcmdə ayırın. Çoxlu donma və ərimədən və ya uzun müddət 4 ° C temperaturda saxlamayın.

    ■ Astarların uyğun olmayan dizaynı (məsələn, astar uzunluğu kifayət deyil, astarlar arasında dimer əmələ gəlmişdir və s.)

    A-3 Mq2+konsentrasiya

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox aşağıdır - Mg -ni mütəmadi olaraq artırın2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-4 Tavlama temperaturu

    ■ Yüksək tavlanma temperaturu astar və şablonun bağlanmasına təsir göstərir. ——Yandırma temperaturunu azaldın və vəziyyəti 2 ° C bir qradiyentlə optimallaşdırın.

    A-5 Uzatma müddəti

    ■ Qısa uzatma müddəti —— Uzatma müddətini artırın.

    S: Yalan pozitiv

    Fenomenlər: Mənfi nümunələr hədəf ardıcıllıq zolaqlarını da göstərir.

    A-1 PCR çirklənməsi

    ■ Hədəf ardıcıllığının və ya gücləndirmə məhsullarının çarpaz çirklənməsi - mənfi nümunədə hədəf ardıcıllığı olan nümunəni diqqətlə pipetləməyin və ya santrifüj borusundan tökməyin. Reaktivlər və ya avadanlıqlar mövcud nuklein turşularını aradan qaldırmaq üçün avtoklavlaşdırılmalı və çirklənmənin mövcudluğu mənfi nəzarət təcrübələri ilə müəyyən edilməlidir.

    ■ Reaktivlərin çirklənməsi - Reaktivləri çoxaldın və aşağı temperaturda saxlayın.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox aşağıdır - Mg -ni mütəmadi olaraq artırın2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    ■ Yanlış astar dizaynı və hədəf ardıcıllığı, hədəf olmayan ardıcıllıqla homologiyaya malikdir. —- Yenidən dizayn astarları.

    S: Qeyri-spesifik gücləndirmə

    Fenomenlər: PCR gücləndirmə bantları, istər böyük, istər kiçik, ya da bəzən hər iki spesifik gücləndirmə zolağı və qeyri-spesifik gücləndirmə zolağı meydana çıxması gözlənilən ölçü ilə uyğun gəlmir.

    A-1 astar

    ■ Zəif primer spesifikliyi

    —- Yenidən dizayn astarı.

    ■ Astar konsentrasiyası çox yüksəkdir - Denaturasiya temperaturunu düzgün şəkildə artırın və denaturasiya müddətini uzatın.

    A-2 Mq2+ konsentrasiya

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox yüksəkdir - Mg2+ konsentrasiyasını düzgün şəkildə azaldın: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-3 Termostabil polimeraza

    ■ Həddindən artıq ferment miqdarı - Enzim miqdarını 0,5 U aralıqlarla uyğun olaraq azaldın.

    A-4 Tavlama temperaturu

    ■ Tavlama temperaturu çox aşağıdır-Tava istiliyini uyğun şəkildə artırın və ya iki mərhələli tavlama üsulunu tətbiq edin

    A-5 PCR dövrü

    ■ Çox PCR dövrü ——PZR dövrlərinin sayını azaldın.

    S: Yamaq və ya ləkə bantları

    A-1 astar—— Zəif spesifiklik —— Astarın yenidən dizaynı, spesifikliyini artırmaq üçün astarın mövqeyini və uzunluğunu dəyişdirin; ya da iç içə PCR aparın.

    A-2 DNT şablonu

    - Şablon təmiz deyil - Şablonu təmizləyin və ya DNT -ni təmizləmə dəstləri ilə çıxarın.

    A-3 Mq2+ konsentrasiya

    ——Mg2+ konsentrasiyası çox yüksəkdir - Mg -ni düzgün şəkildə azaldır2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-4 dNTP

    - DNTP konsentrasiyası çox yüksəkdir - DNTP konsentrasiyasını müvafiq şəkildə azaldın

    A-5 Tavlama temperaturu

    ——Çox aşağı tavlanma temperaturu ——Yuyulma temperaturunu uyğun şəkildə artırın

    A-6 dövrü

    ——Çox çox dövr —Sikl sayını optimallaşdırın

    S: 50 μl PCR reaksiya sisteminə nə qədər şablon DNT əlavə edilməlidir?
    ytry
    S: Uzun parçaları necə gücləndirmək olar?

    İlk addım uyğun polimeraza seçməkdir. Daimi Taq polimeraz, 3'-5 'ekzonükleaz aktivliyinin olmaması səbəbindən yoxlanıla bilməz və uyğunsuzluq fraqmentlərin uzanma səmərəliliyini xeyli azaldacaq. Buna görə də, müntəzəm Taq polimerazası 5 kb -dan böyük hədəf parçalarını təsirli şəkildə gücləndirə bilməz. Xüsusi modifikasiyalı Taq polimeraz və ya digər yüksək sədaqətli polimeraz, genişləndirmə səmərəliliyini artırmaq və uzun fraqment gücləndirmə ehtiyaclarını ödəmək üçün seçilməlidir. Bundan əlavə, uzun fraqmentlərin gücləndirilməsi də astar dizaynının, denaturasiya müddətinin, uzadılma müddətinin, tampon pH-nın və s. Müvafiq tənzimləmə tələb edir. Adətən, 18-24 bp olan primerlər daha yaxşı məhsuldarlığa səbəb ola bilər. Şablonun zədələnməsinin qarşısını almaq üçün, 94 ° C -dəki denatürasiya müddəti dövr başına 30 saniyəyə və ya daha aza endirilməlidir və amplifikasiyadan əvvəl temperaturun 94 ° C -ə yüksəlmə müddəti 1 dəqiqədən az olmalıdır. Üstəlik, genişləndirmə temperaturunu təxminən 68 ° C -də təyin etmək və 1 kb/dəq nisbətinə görə uzadılma müddətini dizayn etmək uzun parçaların təsirli şəkildə gücləndirilməsini təmin edə bilər.

    S: PCR -nin amplifikasiya sədaqətini necə artırmaq olar?

    PCR amplifikasiyasının səhv dərəcəsi yüksək sədaqətlə müxtəlif DNT polimerazalar istifadə etməklə azaldıla bilər. İndiyə qədər tapılan bütün Taq DNA polimerazları arasında Pfu fermenti ən aşağı səhv nisbətinə və ən yüksək sədaqətə malikdir (əlavə olunmuş cədvələ baxın). Enzim seçiminə əlavə olaraq, tədqiqatçılar tampon tərkibini, termostabil polimeraz konsentrasiyasını və PCR dövrü sayını optimallaşdırmaq da daxil olmaqla reaksiya şərtlərini optimallaşdıraraq PCR mutasiya nisbətini daha da azalda bilər.

    Mesajınızı bura yazın və bizə göndərin