2 × Taq PCR Mix

Ultra saf və səmərəli Taq DNA polimeraz.

Taq DNA Polimeraz, Escherichia coli -dən Thermo aquatica DNA Polymerase geni ilə klonlanmış və sonra təmizlənmiş və üç addımlı sütun təmizlənməsi ilə ayrılmış, molekulyar çəkisi 94 kDa olan rekombinant bir proteindir. Ferment yaxşı stabilliyə və güclü spesifikliyə malikdir, ekzogen nukleaza və bakterial DNT çirklənməsinə malik deyil və rutin PCR gücləndirilməsi üçün uyğundur.

Tək borulu Taq MasterMix (Milli Yüksək Texnologiyalı Məhsul Sertifikatı)

■ Taq MasterMix, PCR reaksiyasının spesifikliyini və həssaslığını artırdı və yüksək GC məzmunu, ikincil quruluş və bənzəri olan kompleks şablonları gücləndirə bilər. Hədəf şablonunun ən az 2 nüsxəsi gücləndirilə bilər ki, bu da daha dəqiq təcrübi nəticələr verir.

■ Unikal Taq MasterMix formulu bütün reaksiya sistemini çox sabit edir və təkrar donma-ərimədən və ya 4 ° C-də uzun müddətli saxlamadan aktivliyə təsir etməyəcəkdir.

■ Sabit və səmərəli əvvəlcədən hazırlanmış PCR qarışıq həlli, əməyin intensivliyini və seçmə səhvini əhəmiyyətli dərəcədə azaldaraq əməliyyatı sürətli və sadə hala gətirə bilər. PCR şərtlərinə olan tələbləri azaldan yüksək performanslı PCR gücləndirici və optimallaşdırıcı da qarışığa daxildir.

■ Bu məhsulda həm boyalı, həm də boyasız sistemlər var. Boya ehtiva edən MasterMix məhsulları, tampon yükləmədən, PCR-dən sonra birbaşa elektroforez edilə bilər.

Pişik Yox Qablaşdırma Ölçüsü
4992229 1 ml
4992230 5*1 ml
4992255 1 ml
4992256 5 × 1 ml

Məhsul Detalları

Təcrübə nümunəsi

FAQ

Məhsul Etiketləri

Fəaliyyət tərifi

1 ədəd (U) Taq DNA Polimerazanın aktivliyi, şablon/astar olaraq aktivləşdirilmiş qızılbalıq sperma DNT-dən istifadə edərək 30 dəqiqə ərzində 74 at -də 10 nmol deoksinükleotidi turşuda həll olunmayan maddələrə daxil etmək üçün lazım olan fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir.

Keyfiyyətə nəzarət

SDS-PAGE aşkarlanması ilə təmizlik 99%-dən çoxdur; Ekzogen nukleazın aktivliyi aşkar edilmir; İnsan genomundakı tək nüsxəli gen effektiv şəkildə gücləndirilə bilər; Bir həftə otaq temperaturunda saxlanıldıqda əhəmiyyətli bir fəaliyyət dəyişikliyi yoxdur.

Əsas Texniki Parametrlər

Fermentin 5'-3 'polimeraz aktivliyi və 5'-3' ekzonükleaz aktivliyi vardır və 3'-5 'ekzonükleaz aktivliyi yoxdur. DNT polimerləşmə sürəti 70-75 at -də 1-2 kb/dəqdir. PCR məhsulu, TA-klonlama vektorunda birbaşa klonlaşdırıla bilən 3′-dA çıxıntılarına malikdir.

Tətbiqlər

Ümumiyyətlə, 6 kb-dan aşağı olan və aşağı sədaqət tələblərinə malik olan DNT-nin künt ucundakı amplifikasiya, primer uzantısı, sıralanması və A-quyruğu üçün istifadə olunur.

Bütün məhsullar ODM/OEM üçün fərdiləşdirilə bilər. Ətraflı məlumat üçün,zəhmət olmasa Xüsusi Xidmətə (ODM/OEM) basın


  • Əvvəlki:
  • Sonrakı:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example 1 kb fraqmenti gücləndirmək üçün insan genomu DNT -dən şablon olaraq istifadə etmək
    Experimental Example PCR reaksiyasından sonra elektroforez aşkarlanması üçün 5 μl götürün.
    S: Gücləndirici bantlar yoxdur

    A-1 Şablon

    ■ Şablonda protein çirkləri və ya Taq inhibitorları və s. Var - DNT şablonunu təmizləyin, protein çirklərini çıxarın və ya təmizləyici dəstlərlə şablon DNT çıxarın.

    ■ Şablonun denaturasiyası tamamlanmadı ——Denaturasiya temperaturunu uyğun şəkildə artırın və denaturasiya müddətini uzatın.

    ■ Şablonun deqradasiyası-Şablonu yenidən hazırlayın.

    A-2 astar

    ■ Astarların keyfiyyətsiz olması-Astarı yenidən sintez edin.

    ■ Astar deqradasiyası - Yüksək konsentrasiyalı astarları qorumaq üçün kiçik həcmdə ayırın. Çoxlu donma və ərimədən və ya uzun müddət 4 ° C temperaturda saxlamayın.

    ■ Astarların uyğun olmayan dizaynı (məsələn, astar uzunluğu kifayət deyil, astarlar arasında dimer əmələ gəlmişdir və s.)

    A-3 Mq2+konsentrasiya

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox aşağıdır - Mg -ni mütəmadi olaraq artırın2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-4 Tavlama temperaturu

    ■ Yüksək tavlanma temperaturu astar və şablonun bağlanmasına təsir göstərir. ——Yandırma temperaturunu azaldın və vəziyyəti 2 ° C bir qradiyentlə optimallaşdırın.

    A-5 Uzatma müddəti

    ■ Qısa uzatma müddəti —— Uzatma müddətini artırın.

    S: Yalan pozitiv

    Fenomenlər: Mənfi nümunələr hədəf ardıcıllıq zolaqlarını da göstərir.

    A-1 PCR çirklənməsi

    ■ Hədəf ardıcıllığının və ya gücləndirmə məhsullarının çarpaz çirklənməsi - mənfi nümunədə hədəf ardıcıllığı olan nümunəni diqqətlə pipetləməyin və ya santrifüj borusundan tökməyin. Reaktivlər və ya avadanlıqlar mövcud nuklein turşularını aradan qaldırmaq üçün avtoklavlaşdırılmalı və çirklənmənin mövcudluğu mənfi nəzarət təcrübələri ilə müəyyən edilməlidir.

    ■ Reaktivlərin çirklənməsi - Reaktivləri çoxaldın və aşağı temperaturda saxlayın.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox aşağıdır - Mg -ni mütəmadi olaraq artırın2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    ■ Yanlış astar dizaynı və hədəf ardıcıllığı, hədəf olmayan ardıcıllıqla homologiyaya malikdir. —- Yenidən dizayn astarları.

    S: Qeyri-spesifik gücləndirmə

    Fenomenlər: PCR gücləndirmə bantları, istər böyük, istər kiçik, ya da bəzən hər iki spesifik gücləndirmə zolağı və qeyri-spesifik gücləndirmə zolağı meydana çıxması gözlənilən ölçü ilə uyğun gəlmir.

    A-1 astar

    ■ Zəif primer spesifikliyi

    —- Yenidən dizayn astarı.

    ■ Astar konsentrasiyası çox yüksəkdir - Denaturasiya temperaturunu düzgün şəkildə artırın və denaturasiya müddətini uzatın.

    A-2 Mq2+ konsentrasiya

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox yüksəkdir - Mg2+ konsentrasiyasını düzgün şəkildə azaldın: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-3 Termostabil polimeraza

    ■ Həddindən artıq ferment miqdarı - Enzim miqdarını 0,5 U aralıqlarla uyğun olaraq azaldın.

    A-4 Tavlama temperaturu

    ■ Tavlama temperaturu çox aşağıdır-Tava istiliyini uyğun şəkildə artırın və ya iki mərhələli tavlama üsulunu tətbiq edin

    A-5 PCR dövrü

    ■ Çox PCR dövrü ——PZR dövrlərinin sayını azaldın.

    S: Yamaq və ya ləkə bantları

    A-1 astar—— Zəif spesifiklik —— Astarın yenidən dizaynı, spesifikliyini artırmaq üçün astarın mövqeyini və uzunluğunu dəyişdirin; ya da iç içə PCR aparın.

    A-2 DNT şablonu

    - Şablon təmiz deyil - Şablonu təmizləyin və ya DNT -ni təmizləmə dəstləri ilə çıxarın.

    A-3 Mq2+ konsentrasiya

    ——Mg2+ konsentrasiyası çox yüksəkdir - Mg -ni düzgün şəkildə azaldır2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-4 dNTP

    - DNTP konsentrasiyası çox yüksəkdir - DNTP konsentrasiyasını müvafiq şəkildə azaldın

    A-5 Tavlama temperaturu

    ——Çox aşağı tavlanma temperaturu ——Yuyulma temperaturunu uyğun şəkildə artırın

    A-6 dövrü

    ——Çox çox dövr —Sikl sayını optimallaşdırın

    S: 50 μl PCR reaksiya sisteminə nə qədər şablon DNT əlavə edilməlidir?
    ytry
    S: Uzun parçaları necə gücləndirmək olar?

    İlk addım uyğun polimeraza seçməkdir. Daimi Taq polimeraz, 3'-5 'ekzonükleaz aktivliyinin olmaması səbəbindən yoxlanıla bilməz və uyğunsuzluq fraqmentlərin uzanma səmərəliliyini xeyli azaldacaq. Buna görə də, müntəzəm Taq polimerazası 5 kb -dan böyük hədəf parçalarını təsirli şəkildə gücləndirə bilməz. Xüsusi modifikasiyalı Taq polimeraz və ya digər yüksək sədaqətli polimeraz, genişləndirmə səmərəliliyini artırmaq və uzun fraqment gücləndirmə ehtiyaclarını ödəmək üçün seçilməlidir. Bundan əlavə, uzun fraqmentlərin gücləndirilməsi də astar dizaynının, denaturasiya müddətinin, uzadılma müddətinin, tampon pH-nın və s. Müvafiq tənzimləmə tələb edir. Adətən, 18-24 bp olan primerlər daha yaxşı məhsuldarlığa səbəb ola bilər. Şablonun zədələnməsinin qarşısını almaq üçün, 94 ° C -dəki denatürasiya müddəti dövr başına 30 saniyəyə və ya daha aza endirilməlidir və amplifikasiyadan əvvəl temperaturun 94 ° C -ə yüksəlmə müddəti 1 dəqiqədən az olmalıdır. Üstəlik, genişləndirmə temperaturunu təxminən 68 ° C -də təyin etmək və 1 kb/dəq nisbətinə görə uzadılma müddətini dizayn etmək uzun parçaların təsirli şəkildə gücləndirilməsini təmin edə bilər.

    S: PCR -nin amplifikasiya sədaqətini necə artırmaq olar?

    PCR amplifikasiyasının səhv dərəcəsi yüksək sədaqətlə müxtəlif DNT polimerazalar istifadə etməklə azaldıla bilər. İndiyə qədər tapılan bütün Taq DNA polimerazları arasında Pfu fermenti ən aşağı səhv nisbətinə və ən yüksək sədaqətə malikdir (əlavə olunmuş cədvələ baxın). Enzim seçiminə əlavə olaraq, tədqiqatçılar tampon tərkibini, termostabil polimeraz konsentrasiyasını və PCR dövrü sayını optimallaşdırmaq da daxil olmaqla reaksiya şərtlərini optimallaşdıraraq PCR mutasiya nisbətini daha da azalda bilər.

    Mesajınızı bura yazın və bizə göndərin