Serum/Plazma Sirkulyasiya edən DNT Dəsti

A-1 Başlanğıc nümunədə hüceyrələrin və ya virusun aşağı konsentrasiyası-Hüceyrələrin və ya virusların konsentrasiyasını zənginləşdirin.

A-2 Nümunələrin qeyri-kafi lizisi-Nümunələr lizis tamponu ilə hərtərəfli qarışdırılmamışdır. Pulse-vortekslə 1-2 dəfə yaxşıca qarışdırmaq məsləhət görülür. - Proteinaz K -nın aktivliyinin azalması nəticəsində yaranan qeyri -kafi hüceyrə lizisi - Yetərincə isti vanna vaxtı səbəbiylə hüceyrə lizisinin kifayət qədər olmaması və ya zülalın parçalanması. Lizatdakı bütün qalıqları çıxarmaq üçün toxumanı kiçik parçalara ayırmaq və hamam müddətini uzatmaq təklif olunur.

A-3 DNT adsorbsiyasının qeyri-kafi olması. -Lizatın fırlanma sütununa köçürülməsindən əvvəl heç bir etanol və ya 100% etanol əvəzinə aşağı faiz əlavə edilməmişdir.

A-4 Təmizləmə tamponunun pH dəyəri çox aşağıdır. -pH-ı 8.0-8.3 aralığına ayarlayın.

Eluentdə qalıq etanol.

—Eluentdə qalıq yuyucu tampon PW var. Etanol, spin kolonunu 3-5 dəqiqə santrifüj etməklə və sonra otaq temperaturunda və ya 50 ℃ inkubatorda 1-2 dəqiqə yerləşdirməklə çıxarıla bilər.

A-1 Nümunə təzə deyil. - Nümunədəki DNT -nin pozulub -pozulmadığını müəyyən etmək üçün nəzarət olaraq müsbət nümunə DNT çıxarın.

A-2 Yanlış əvvəlcədən müalicə. - Həddindən artıq maye azotun üyüdülməsi, nəmin bərpası və ya çox miqdarda nümunə səbəb olur.

Müxtəlif nümunələr üçün əvvəlcədən hazırlıqlar fərqli olmalıdır. Bitki nümunələri üçün, maye azotda yaxşıca üyüdülməsinə əmin olun. Heyvan nümunələri üçün homojenləşdirin və ya maye azotda yaxşıca üyüdün. G+ bakteriyası və maya kimi qırılması çətin olan hüceyrə divarları olan nümunələr üçün hüceyrə divarlarını sındırmaq üçün lizozim, litikaza və ya mexaniki üsullardan istifadə edilməsi tövsiyə olunur.

4992201/4992202 Bitki Genomik DNT Kiti ekstraksiya üçün xloroform tələb edən sütun əsaslı bir üsul qəbul edir. Xüsusilə müxtəlif bitki nümunələri, eləcə də bitki quru tozu üçün uyğundur. Hi-DNAsecure Bitki Kiti də sütun əsaslıdır, lakin fenol/xloroform ekstraksiyasına ehtiyac duymadan onu təhlükəsiz və toksik etmir. Yüksək polisakkarid və polifenol tərkibli bitkilər üçün uyğundur. 4992709/4992710 DNAquick Bitki Sistemi maye əsaslı bir üsul qəbul edir. Fenol/xloroformun çıxarılmasına da ehtiyac yoxdur. Təmizləmə proseduru nümunənin başlanğıc məbləği üçün heç bir məhdudiyyət qoyulmadan sadə və sürətlidir, buna görə istifadəçilər miqdarı eksperimental tələblərə uyğun olaraq çevik şəkildə tənzimləyə bilərlər. Yüksək məhsuldarlıqla böyük ölçüdə gDNA parçaları əldə edilə bilər.

Genomik DNT, TIANamp Blood DNA Kit tərəfindən müxtəlif miqdarda insan tam qan nümunələrindən çıxarılmışdır. Nəticələr aşağıdakı kimidir. Nəticələr yalnız istinad olaraq verilmişdir, faktiki hasilat nəticələri nümunələrin şərtlərindən asılıdır.

Qan laxtası DNT çıxarılması, protokolu qan laxtası DNT çıxarılması üçün xüsusi təlimata dəyişdirərək bu iki dəstdə verilən reaktivlərdən istifadə etməklə həyata keçirilə bilər. Qan laxtası DNT çıxarma protokolunun yumşaq nüsxəsi tələb edildikdə verilə bilər.

Təzə nümunəni 1 ml PBS, normal şoran və ya TE tamponu ilə dayandırın. Nümunəni homojenizatorla tamamilə homojenləşdirin və çöküntünü santrifüj edərək borunun dibinə toplayın. Üzərinə atın və çöküntünü 200 μl tampon GA ilə yenidən süspansiyon halına salın. Təlimata uyğun olaraq aşağıdakı DNA təmizlənməsi həyata keçirilə bilər.

Plazma, zərdab və bədən mayesi nümunələrində gDNA -nın təmizlənməsi üçün TIANamp Micro DNA Kit tövsiyə olunur. Serum/plazma nümunələrindən gDNA virusunun təmizlənməsi üçün TIANamp Virus DNA/RNA Kitindən istifadə etmək tövsiyə olunur. Serum və plazma nümunələrindən bakterial gDNA -nın təmizlənməsi üçün TIANamp Bacteria DNA Kit tövsiyə olunur (müsbət bakteriyalar üçün lizozim daxil edilməlidir). Tüpürcək nümunələri üçün Hi-Swab DNA Kit və TIANamp Bacteria DNA Kit tövsiyə olunur.

Mantar genomunun çıxarılması üçün DNAsecure Bitki Kiti və ya DNAquick Bitki Sistemi tövsiyə olunur. Maya genomunun çıxarılması üçün TIANamp Maya DNA Kiti tövsiyə olunur (litikaza özünü hazırlamalıdır).