Siçan toxuması birbaşa PCR dəsti

Hədəf geninin çıxarılmadan birbaşa heyvan toxuması nümunələrindən sürətli amplifikasiyası.

Mouse Tissue Direct PCR Kit, sürətli genomik DNT hazırlığı və PCR amplifikasiyası üçün bütün reagentləri ehtiva edən bənzərsiz bir qablaşdırma dizaynını qəbul edir. Siçan toxumalarından (quyruq, qulaq və barmaq) bir addım genom DNT təmizlənməsi və sonrakı PCR gücləndirilməsi və aşkarlanması üçün tətbiq edilir. Bütün prosesə homogenləşmə, parçalanma, bir gecədə həzm, üzvi həlledicilərin çıxarılması, etanol çöküntüsü və ya sütun təmizlənməsi addımları daxil deyil. Sadə və sürətli əməliyyatlarla sabit nəticələr əldə edilə bilər.

Bu dəst tərəfindən təmin edilən 2 × Dir PCR MasterMix, zülallar kimi çirkləri çıxarmadan DNT -ni səmərəli və xüsusi olaraq gücləndirə bilən yüksək uyğunluqlu bir PCR reagentidir. Bu reaktivin tərkibində antikorla dəyişdirilmiş isti başlanğıc varTaq DNT polimeraz, dNTPs, MgCl2, tamponlar, həmçinin PCR reaksiyası üçün gücləndirici, optimallaşdırıcı və stabilizator. PCR reaksiyası, təxminən çıxarılmış şablon və xüsusi astarlar əlavə etməklə həyata keçirilə bilər. Bütün proses sürətli, sadə, həssas, spesifik və sabitdir, xüsusən də yüksək məhsuldarlıq taraması üçün əlverişlidir. 2 × Dir PCR MasterMix, qarışıq elektroforez boyası ehtiva edir, belə ki, PCR məhsulları reaksiyadan sonra birbaşa elektroforez aşkarlanması üçün göndərilə bilər. PCR məhsulunun 3 'ucu, TA klonlanması üçün istifadə edilə bilən A quyruğuna malikdir.

Pişik Yox Qablaşdırma Ölçüsü
4992531 20 µl × 50 rxn
4992532 20 µl × 200 rxn

Məhsul Detalları

İş axını

Təcrübə nümunəsi

FAQ

Məhsul Etiketləri

Xüsusiyyətləri

■ Sadə və sürətli: Genomik DNT siçan toxumalarından maye azot üyütmədən və üzvi həlledici çıxarılmadan 60 dəqiqə ərzində sürətlə çıxarıla bilər.
■ Geniş tətbiq: Siçan quyruğundan, qulağından, barmağından və digər toxumalardan genomik DNT-nin bir addım çıxarılması üçün uyğundur.
■ Yüksək spesifiklik: Bu məhsulda istifadə edilən Taq polimeraz, genotip və transgenik identifikasiya üçün xüsusilə uyğun olan yüksək şablon və primer yaxınlığı və amplifikasiya spesifikliyinə malik antikorla dəyişdirilmiş isti başlanğıc fermentidir.
■ Gen aşkarlanması: Məhsulun etibarlı nəticələrlə işləməsi asandır və xüsusilə yüksək səviyyə təhlili və siçan toxumalarının aşkarlanması üçün uyğundur.

Bütün məhsullar ODM/OEM üçün fərdiləşdirilə bilər. Ətraflı məlumat üçün,zəhmət olmasa Xüsusi Xidmətə (ODM/OEM) basın


  • Əvvəlki:
  • Sonrakı:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×

    Workflow

    Experimental Example

    Mouse Tissue Direct PCR Kit və A təchizatçısının müvafiq məhsulundan istifadə edərək siçan quyruğundan, siçan qulağından və siçovul quyruğundan 1000 bp, 2000 bp və 3000 bp fraqmentləri gücləndirmək. Nəticə göstərdi ki, Mouse Tissue Direct PCR Kit daha yaxşı spesifikliyə və müvəffəqiyyətə malikdir.

    S: Gücləndirici bantlar yoxdur

    A-1 Şablon

    ■ Şablonda protein çirkləri və ya Taq inhibitorları və s. Var - DNT şablonunu təmizləyin, protein çirklərini çıxarın və ya təmizləyici dəstlərlə şablon DNT çıxarın.

    ■ Şablonun denaturasiyası tamamlanmadı ——Denaturasiya temperaturunu uyğun şəkildə artırın və denaturasiya müddətini uzatın.

    ■ Şablonun deqradasiyası-Şablonu yenidən hazırlayın.

    A-2 astar

    ■ Astarların keyfiyyətsiz olması-Astarı yenidən sintez edin.

    ■ Astar deqradasiyası - Yüksək konsentrasiyalı astarları qorumaq üçün kiçik həcmdə ayırın. Çoxlu donma və ərimədən və ya uzun müddət 4 ° C temperaturda saxlamayın.

    ■ Astarların uyğun olmayan dizaynı (məsələn, astar uzunluğu kifayət deyil, astarlar arasında dimer əmələ gəlmişdir və s.)

    A-3 Mq2+konsentrasiya

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox aşağıdır - Mg -ni mütəmadi olaraq artırın2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-4 Tavlama temperaturu

    ■ Yüksək tavlanma temperaturu astar və şablonun bağlanmasına təsir göstərir. ——Yandırma temperaturunu azaldın və vəziyyəti 2 ° C bir qradiyentlə optimallaşdırın.

    A-5 Uzatma müddəti

    ■ Qısa uzatma müddəti —— Uzatma müddətini artırın.

    S: Yalan pozitiv

    Fenomenlər: Mənfi nümunələr hədəf ardıcıllıq zolaqlarını da göstərir.

    A-1 PCR çirklənməsi

    ■ Hədəf ardıcıllığının və ya gücləndirmə məhsullarının çarpaz çirklənməsi - mənfi nümunədə hədəf ardıcıllığı olan nümunəni diqqətlə pipetləməyin və ya santrifüj borusundan tökməyin. Reaktivlər və ya avadanlıqlar mövcud nuklein turşularını aradan qaldırmaq üçün avtoklavlaşdırılmalı və çirklənmənin mövcudluğu mənfi nəzarət təcrübələri ilə müəyyən edilməlidir.

    ■ Reaktivlərin çirklənməsi - Reaktivləri çoxaldın və aşağı temperaturda saxlayın.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox aşağıdır - Mg -ni mütəmadi olaraq artırın2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    ■ Yanlış astar dizaynı və hədəf ardıcıllığı, hədəf olmayan ardıcıllıqla homologiyaya malikdir. —- Yenidən dizayn astarları.

    S: Qeyri-spesifik gücləndirmə

    Fenomenlər: PCR gücləndirmə bantları, istər böyük, istər kiçik, ya da bəzən hər iki spesifik gücləndirmə zolağı və qeyri-spesifik gücləndirmə zolağı meydana çıxması gözlənilən ölçü ilə uyğun gəlmir.

    A-1 astar

    ■ Zəif primer spesifikliyi

    —- Yenidən dizayn astarı.

    ■ Astar konsentrasiyası çox yüksəkdir - Denaturasiya temperaturunu düzgün şəkildə artırın və denaturasiya müddətini uzatın.

    A-2 Mq2+ konsentrasiya

    ■ Mg2+ konsentrasiyası çox yüksəkdir - Mg2+ konsentrasiyasını düzgün şəkildə azaldın: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-3 Termostabil polimeraza

    ■ Həddindən artıq ferment miqdarı - Enzim miqdarını 0,5 U aralıqlarla uyğun olaraq azaldın.

    A-4 Tavlama temperaturu

    ■ Tavlama temperaturu çox aşağıdır-Tava istiliyini uyğun şəkildə artırın və ya iki mərhələli tavlama üsulunu tətbiq edin

    A-5 PCR dövrü

    ■ Çox PCR dövrü ——PZR dövrlərinin sayını azaldın.

    S: Yamaq və ya ləkə bantları

    A-1 astar—— Zəif spesifiklik —— Astarın yenidən dizaynı, spesifikliyini artırmaq üçün astarın mövqeyini və uzunluğunu dəyişdirin; ya da iç içə PCR aparın.

    A-2 DNT şablonu

    - Şablon təmiz deyil - Şablonu təmizləyin və ya DNT -ni təmizləmə dəstləri ilə çıxarın.

    A-3 Mq2+ konsentrasiya

    ——Mg2+ konsentrasiyası çox yüksəkdir - Mg -ni düzgün şəkildə azaldır2+ konsentrasiyası: Mg -ni optimallaşdırın2+ optimal Mg təyin etmək üçün 0,5 mM aralığında 1 mM -dən 3 mM -ə qədər olan bir sıra reaksiyalarla konsentrasiyası2+ hər şablon və astar üçün konsentrasiya.

    A-4 dNTP

    - DNTP konsentrasiyası çox yüksəkdir - DNTP konsentrasiyasını müvafiq şəkildə azaldın

    A-5 Tavlama temperaturu

    ——Çox aşağı tavlanma temperaturu ——Yuyulma temperaturunu uyğun şəkildə artırın

    A-6 dövrü

    ——Çox çox dövr —Sikl sayını optimallaşdırın

    S: 50 μl PCR reaksiya sisteminə nə qədər şablon DNT əlavə edilməlidir?
    ytry
    S: Uzun parçaları necə gücləndirmək olar?

    İlk addım uyğun polimeraza seçməkdir. Daimi Taq polimeraz, 3'-5 'ekzonükleaz aktivliyinin olmaması səbəbindən yoxlanıla bilməz və uyğunsuzluq fraqmentlərin uzanma səmərəliliyini xeyli azaldacaq. Buna görə də, müntəzəm Taq polimerazası 5 kb -dan böyük hədəf parçalarını təsirli şəkildə gücləndirə bilməz. Xüsusi modifikasiyalı Taq polimeraz və ya digər yüksək sədaqətli polimeraz, genişləndirmə səmərəliliyini artırmaq və uzun fraqment gücləndirmə ehtiyaclarını ödəmək üçün seçilməlidir. Bundan əlavə, uzun fraqmentlərin gücləndirilməsi də astar dizaynının, denaturasiya müddətinin, uzadılma müddətinin, tampon pH-nın və s. Müvafiq tənzimləmə tələb edir. Adətən, 18-24 bp olan primerlər daha yaxşı məhsuldarlığa səbəb ola bilər. Şablonun zədələnməsinin qarşısını almaq üçün, 94 ° C -dəki denatürasiya müddəti dövr başına 30 saniyəyə və ya daha aza endirilməlidir və amplifikasiyadan əvvəl temperaturun 94 ° C -ə yüksəlmə müddəti 1 dəqiqədən az olmalıdır. Üstəlik, genişləndirmə temperaturunu təxminən 68 ° C -də təyin etmək və 1 kb/dəq nisbətinə görə uzadılma müddətini dizayn etmək uzun parçaların təsirli şəkildə gücləndirilməsini təmin edə bilər.

    S: PCR -nin amplifikasiya sədaqətini necə artırmaq olar?

    PCR amplifikasiyasının səhv dərəcəsi yüksək sədaqətlə müxtəlif DNT polimerazalar istifadə etməklə azaldıla bilər. İndiyə qədər tapılan bütün Taq DNA polimerazları arasında Pfu fermenti ən aşağı səhv nisbətinə və ən yüksək sədaqətə malikdir (əlavə olunmuş cədvələ baxın). Enzim seçiminə əlavə olaraq, tədqiqatçılar tampon tərkibini, termostabil polimeraz konsentrasiyasını və PCR dövrü sayını optimallaşdırmaq da daxil olmaqla reaksiya şərtlərini optimallaşdıraraq PCR mutasiya nisbətini daha da azalda bilər.

    Mesajınızı bura yazın və bizə göndərin